Un microscope confocal, est un microscope qui a la propriété de réaliser des images de très faible profondeur de champ. Une série de mesures à différentes hauteurs et profondeurs de champs de la lentille permet une reconstruction 3D par ordinateurs. L’observation est indirecte. Les données doivent être traitées par ordinateur.
La plupart du temps on utilise un microscope à fluorescence, pour obtenir un rendu optimal de l’image et maximiser la puissance des outils à disposition.
Ce sont des dispositifs coûteux que nous ne couvrons pas en détails.
Principe du microscope confocal
Similaire au microscope à grand champ, le microscope confocal utilise l’optique de fluorescence. Mais au lieu d’éclairer l’ensemble de l’échantillon en une seule fois, la lumière laser est focalisée sur un point défini à une profondeur spécifique dans l’échantillon. Cela entraîne l’émission d’une lumière fluorescente à cet endroit précis. Un trou d’épingle à l’intérieur du trajet optique coupe les signaux hors foyer. Cela permet ainsi aux seuls signaux de fluorescence provenant du point éclairé d’entrer dans le détecteur de lumière.
En balayant le spécimen selon un modèle de trame, on crée des images d’un seul plan optique. Ensuite, les objets 3D se visualisent en balayant plusieurs plans optiques et en les empilant à l’aide d’un logiciel de déconvolution microscopique. Il est également possible d’analyser des colorations d’immunofluorescence multicolores à l’aide de microscopes de pointe. Ces derniers comprennent plusieurs lasers et filtres d’émission/excitation.
